TIANamp Blood DNAMidiキット

A-1開始サンプル中の細胞またはウイルスの濃度が低い—細胞またはウイルスの濃度を高めます。

A-2サンプルの不十分な溶解—サンプルは溶解バッファーと完全に混合されていません。1〜2回パルスボルテックスして完全に混合することをお勧めします。—プロテイナーゼKの活性低下による細胞溶解不足。—温浴時間が不十分なため、細胞溶解またはタンパク質分解が不十分。組織を細かく切り、バスタイムを延長してライセートの残留物をすべて除去することをお勧めします。

A-3DNA吸着が不十分です。—ライセートをスピンカラムに移す前に、エタノールを添加しないか、100％エタノールの代わりに低パーセンテージを添加しました。

A-4溶出バッファーのpH値が低すぎます。-pHを8.0〜8.3の間に調整します。

溶離液中の残留エタノール。

-溶離液に洗浄バッファーPWが残っています。エタノールは、スピンカラムを3〜5分間遠心分離した後、室温または50℃のインキュベーターに1〜2分間置くことで除去できます。

A-1サンプルは新鮮ではありません。-陽性サンプルDNAをコントロールとして抽出し、サンプル中のDNAが分解されているかどうかを判断します。

A-2不適切な前処理。-液体窒素の過剰な粉砕、水分の回復、またはサンプルの量が多すぎることが原因です。

前処理はサンプルごとに異なる必要があります。植物サンプルの場合は、液体窒素で十分に粉砕してください。動物サンプルの場合、液体窒素でホモジナイズまたは完全に粉砕します。グラム陽性菌や酵母など、細胞壁が壊れにくいサンプルの場合は、リゾチーム、リチカーゼ、または機械的方法を使用して細胞壁を壊すことをお勧めします。

4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kitは、抽出にクロロホルムを必要とするカラムベースの方法を採用しています。さまざまな植物サンプルや植物乾燥粉末に特に適しています。Hi-DNAsecure Plant Kitもカラムベースですが、フェノール/クロロホルム抽出の必要がないため、安全で毒性がありません。多糖類とポリフェノールの含有量が高い植物に適しています。4992709/4992710 DNAquick Plant Systemは、液体ベースの方法を採用しています。フェノール/クロロホルム抽出も必要ありません。精製手順は、サンプルの開始量に制限がなく、シンプルで高速であるため、ユーザーは実験要件に応じて柔軟に量を調整できます。大きなサイズのgDNAフラグメントを高収率で得ることができます。

ゲノムDNAは、TIANamp Blood DNAKitによってさまざまな量のヒト全血サンプルから抽出されました。結果は以下のとおりです。結果は参照用としてのみ記載されており、実際の抽出結果はサンプルの条件によって異なります。

血餅DNA抽出は、プロトコルを血餅DNA抽出の特定の指示に変更するだけで、これら2つのキットに含まれている試薬を使用して実行できます。血栓DNA抽出プロトコルのソフトコピーは、リクエストに応じて発行できます。

新鮮なサンプルを1mlのPBS、通常の生理食塩水、またはTEバッファーで懸濁します。ホモジナイザーでサンプルを完全にホモジナイズし、遠心分離によって沈殿物をチューブの底に集めます。上清を捨て、沈殿物を200μlのバッファーGAで再懸濁します。以下のDNA精製は指示に従って行うことができます。

血漿、血清、体液サンプル中のgDNAの精製には、TIANamp Micro DNAKitをお勧めします。血清/血漿サンプルからウイルスgDNAを精製するには、TIANamp Virus DNA / RNAKitをお勧めします。血清および血漿サンプルから細菌gDNAを精製するには、TIANamp Bacteria DNA Kitをお勧めします（陽性細菌にはリゾチームを含める必要があります）。唾液サンプルには、Hi-Swab DNAKitとTIANampBacteria DNAKitをお勧めします。

真菌ゲノムの抽出には、DNAsecure PlantKitまたはDNAquickPlantSystemをお勧めします。酵母ゲノムの抽出には、TIANamp Yeast DNA Kitをお勧めします（リチカーゼは自己調製する必要があります）。